销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > WB过程中最重要的环节——转膜

    WB过程中最重要的环节——转膜

    发布时间: 2021-09-14  点击次数: 2764次

    ① 跑到溴酚蓝距离最下缘 25px 时配电转液(tris3.03g,甘氨酸 14.4g,甲醇 100ml,定容至 1L) 

    ② 在电转液中剥胶,裁胶,剪膜,膜活化(甲醇 1min,去离子水 1min,电解液 15min) 

    ③ “三明治"黑板~海绵~三层滤纸~胶~膜(正面朝下,分清左右,与胶对应)~3 层滤纸~海绵 ~白板,夹紧后放入电转槽中。(海绵,滤纸,膜需浸润透,过程中不能干,赶赶气泡) 

    ④ 连接电源,一定要注意红对红,黑对黑,定电流和时间(150mA,1h,若分子量大于 90, 再加 200mA,2h)具体情况具体分析


    经验总结: 

    溴酚蓝跑到最终的距离是根据你所需要切的分子量决定的,假如你就只需要切一条 ACTIN(43Kda)这样的,你完全只需要跑到下胶,看到差不多 marker 分开了就可以切胶了。假如你要从最上到最下切好多条出来,你则需要把溴酚蓝尽量跑到最下面,这样 marker 容易被跑开,有利于切胶。滤纸和 PVDF 膜的裁剪必须要整齐,干净,标记清晰。 PVDF 膜型号的选择要正确。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔径 0.45mm 的膜就足够了。太小的则需要选择孔径为 0.22mm 的膜。关于转膜是否要加 SDS 的问题。SDS 带负电,加 SDS 一般是针对那些分子量大的 WB,加入 SDS 可以增加分子导电性,这样更利于转膜。 关于转膜电流,分子是否能够转过去和转膜时间没有必要关系,而更在于转膜电流的大小。 举个例子,200kDa 的分子量,你用 90mAh 就算转一年都转不过去。


在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]