销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 细胞为何总是抱团生长?

    细胞为何总是抱团生长?

    发布时间: 2021-10-08  点击次数: 806次

    细胞为啥总是一言不合就抱团生长?!

    是细胞污染了还是正常现象?

    是消化不好了还是铺板有问题?

    抱团细胞越来越多,怎么样才能让细胞分开生长?

    请认真阅读以下干货,看看能否帮您答疑解惑!


    细胞抱团一定代表细胞状态不好吗?

    细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:


    1、若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,就是状态好的,说明细胞在分裂。

    2、但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片,如下图:

    细胞为何总是抱团生长?

    ▲RAW264.7细胞-正常状态

    细胞为何总是抱团生长?

    ▲RAW264.7细胞-异常状态

    细胞为何总是抱团生长?

    ▲H9c2细胞-正常状态

    细胞为何总是抱团生长?

    ▲H9c2细胞-异常状态


    3、细胞抱团是因为细胞污染了吗?一般细胞培养液清亮,就不是污染。如果是污染了的话,可以通过观察培养液颜色,若污染,则很浑浊。


    细胞为啥总是喜欢抱团?

    • 细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。

    • 细胞离心速度过大或时间太长。

    • 消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!

    • 状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。

    • 传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。

    • 传代后细胞铺板不均匀。

    • 有可能是杂细胞,或者死细胞。

    • 细胞未消化开。

    • 非震荡培养或细胞量过多的话就会成团。


    如何避免细胞抱团?

    • 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

    • 对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。

    • 细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现堆叠生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

    • 消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。

    • 消化过程需要使用枪头轻轻吹打,切忌使劲拍培养瓶的侧壁。拍瓶子想要将细胞拍散的力度对于细胞来说相当于大地震,细胞本身是无法承受如此振荡的。


    细胞抱团了,要如何处理?

    • 如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。

    • 如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

    • 如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。


    ☆ 如若需要细胞进行抱团,那么该如何处理呢?

    以MSC诱导成软骨方向分化为例:可使用96孔板,每个孔板接种30万个细胞。



    总结

    引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。




在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]