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    DNA提取方法简介

    发布时间: 2021-10-22  点击次数: 1551次

    一、DNA提取方法简介


    1基因组DNA的提取

    1.1、CTAB法

    1.2SDS

    1.3、其它

    2非基因组DNA的提取

    2.1、质粒DNA的提取

    2.1.1、碱裂解法

    2.1.2煮沸法

    2.2线粒体、叶绿体DNA的提取

    差速离心结合SDS裂解法

    1、基因组DNA的提取


    1.2SDS


    SDS法原理


    SDS是一种阴离子去垢剂,在高温(5565℃)条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸;
    提高盐(KAcNH4Ac)浓度并降低温度(冰浴),使蛋白质及多糖杂质沉淀,离心后除去沉淀;
    上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA


    SDSDNA提取缓冲液


     图片


    改良的SDS法


     图片


    水浴 60min, 其间缓慢摇动几次。加入150ul 5mol/ LKac, 混匀冰浴15min 左右。

    SDS法流程图 (以动物组织为例)


    图片



    1.3、其它

    根据细胞裂解方式的不同有:

    物理方式

    玻璃珠法

    研磨法

    超声波法

    冻融法

    化学方式

    异硫氰酸胍法

    碱裂解法

    生物方式

    酶法

    根据核酸分离纯化方式的不同有:

    吸附材料结合法

     

     

    硅质材料

     

    高盐低pH值结合核酸,低盐高pH值洗脱。快捷高效。

    阴离子交换树脂

    低盐高pH值结合核酸,高盐低pH值洗脱。适用于纯度要求高的实验。

    磁珠

    磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物,从而达到分离目的。

    浓盐法

    利用RNPDNP在盐溶液中溶解度不同,将二者分离

    有机溶剂抽提法

    有机溶剂作为蛋白变性剂,同时抑制核酸酶的降解作用

    密度梯度离心法

    利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物



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