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    补体介导法细胞毒实验

    发布时间: 2021-11-01  点击次数: 304次
    材料与仪器

    C57BL/6J小鼠
    Hank’s液 单克隆抗体 补体 伊红-Y染液
    眼科剪 眼科镊 平皿 不锈钢网 试管 吸量管 尖吸管 载玻片 盖玻片 显微镜

    实验步骤


    一、实验方法
     
    1.  小鼠胸腺细胞悬液的制备:将4~6周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死,取出胸腺放入已加入约4 ml冷Hank’s液的平皿中,在100目的不锈钢网上研磨后,过筛,放入试管,离心1 000 rpm,5分钟,用Hank’s液洗两次。将沉淀的细胞重悬于Hank’s液中,配成1×107/ml细胞悬液。
     
    2.  取试管3支,标明顺序,依据下表依次加入1×107/ml胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1的单克隆抗体(最适稀释度)及Hank’s液,放入37℃水浴30分钟。
     
    3.  取出后每管加入1%伊红-Y染液1滴,混匀,室温放置2分钟。
     
    4.  重新混匀后分别在一张载玻片上滴片,加盖玻片镜检。先在低倍镜下观察,再用高倍镜观察,比较3管中细胞死活情况。
     
    二、实验结果
     
    死细胞呈红色,无光泽且肿胀变大;活细胞不着色、有光泽且形态正常。
     
    高倍镜下计数200个细胞并计算其中死细胞的百分数。计算公式如下:死细胞百分数= EQ EQ \F(实验管死细胞数%-对照管死细胞数%,100%-对照管死细胞数%)



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