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    传代细胞培养实验操作步骤

    发布时间: 2021-11-12  点击次数: 610次
    材料与仪器

    细胞
    Hanks 胰蛋白酶 EDTA 培养液
    吸管 培养瓶

    实验步骤


    一、贴壁细胞:HeLa细胞的传代培养


    1. 选取生长密度80%左右的HeLa细胞,在生物安全柜中操作,吸去培养皿中的旧培养基,加入2 mL的D-Hanks溶液,漂洗细胞以除去残留的血清。


    2. 吸去培养皿中的D-Hanks溶液,加入2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液,于37℃消化2~3 min(如消化程度不够,可延长时间),倒置显微镜下观察细胞,当大部分细胞变圆时,轻轻吸去酶消化液(如果有较多细胞漂起,需要直接加入完全培养基来终止胰蛋白酶的消化反应)。


    3. 加入4 mL完全培养基,用移液管反复吹打细胞成为细胞悬液。将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心5 min。


    4. 轻轻吸去上清后用完全培养基重悬细胞,把细胞悬液一分为二或者一分为三后分别转移到新的培养皿中。


    5. 接种好的细胞,应在培养皿上标记上细胞名称、本次传代日期和操作人,轻轻摇匀后转移到CO2培养箱中于37℃培养。


    6. 细胞培养24 h后,根据培养基的颜色及细胞的生长密度进行相应的操作(更换新鲜培养基或者再次传代处理)。


    二、悬浮细胞或半贴壁细胞的传代培养

      

    悬浮细胞不贴壁(半贴壁细胞贴壁不紧),所以不需要借助胰蛋白酶消化,具体过程如下:


    1. 取状态良好的细胞,在生物安全柜中操作,用移液管把细胞吹打均匀。


    2. 把细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心5 min。


    3. 轻轻吸去上清后用完全培养基重悬细胞,把细胞悬液一分为二或者一分为三后分别转移到新的培养皿中。


    4. 接种好的细胞,应在培养皿上标记上细胞名称、本次传代日期和操作人.轻轻摇匀后转移到CO2培养箱中于37℃培养。


    5. 细胞培养24 h后,根据培养基的颜色及细胞的生长密度进行相应的操作(更换新鲜培养基或者再次传代处理)。



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