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    RAW264.7细胞太容易分化,到底怎样才能养好它?

    发布时间: 2021-12-02  点击次数: 1523次

    养好RAW 264.7之基础篇



    养好RAW 264.7的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。


    细胞名称

    RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

    细胞别称

    RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7

    种属

    小鼠(雄性,成年BALB/c鼠)

    组织来源

    Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤

    生长特性

    贴壁细胞

    细胞形态

    不规则形(圆形、短梭形)

    生长培养基

    DMEM+10% FBS+1% P/S

    培养环境

    气相:95%空气;5%CO2  温度:37℃

    推荐传代比例

    1:3 - 1:6

    冻存液配方

    55% DMEM+40% FBS+5% DMSO


    图片

    ▲RAW 264.7生长图片


    养好RAW 264.7之进阶篇1


    除了基础条件,其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气",比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题,小普来一 一为大家解答。


    问题1 :收货后,细胞不见了


    小普总是会收到这类反馈:收到细胞,期待值满满地打开包装,但在显微镜下却找不到细胞!


    这是为RAW 264.7 细胞贴壁较松,快递运输路上受到颠簸,可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。


    这时候不用担心,把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。


    如果静置后看到的细胞仍偏少,请将瓶子里的培养基都转移到离心管里,1200rpm(约250g)离心3分钟,即可看到沉淀的细胞。


    细胞全部脱落,慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是较为合适的方法。


    问题2 :收货处理后,细胞不贴壁


    将细胞离心收集,用新鲜的培养基重悬细胞放到新的培养瓶里之后,可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。


    这种情况下,把细胞离心收集,用1mL培养基重悬,慢慢地,轻轻地吹打,直到细胞被吹成单细胞,就可以重新铺板了。


    RAW 264.7脱落后倾向于抱团,抱团时细胞是活着的,但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞,不然细胞很难重新贴壁。


    养好RAW 264.7之进阶篇2


    正确的传代方法是养好RAW 264.7的关键,每一步操作都要细致入微,稍有不慎细胞就分化了。


    RAW 264.7不能用胰酶消化,许多实验室用细胞刮传代,这是一种非常经典好用的方法。


    小普在养RAW 264.7细胞这十几年里,摸索出一个更不错的方法:吹打传代


    吹打传代操作简单,对养细胞的萌新们更友好,也能更好地控制细胞分化率。



    吹打传代步骤

    01

    轻拍几下培养皿

    02

    用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来(吹不下来的舍弃)

    03

    细胞吹下来后转移到15ml离心管

    04

    1200rpm(约250g) 离心3min

    05

    去上清,用新鲜培养基重悬细胞

    06

    按比例接种到新的培养皿中



    吹打传代时机

    01

    吹打传代时机

    02

    当细胞密度较低的时候,可能不太好吹下来。

    03

    当细胞密度达到80%~90%的时候,最容易吹下。

    图片

    推荐传代的密度


    养好RAW 264.7之终结篇


    讲了那么多如何处理RAW 264.7分化的情况,那分化了的细胞到底是什么形态呢?


    图片

    分化的RA264.7

    分化的细胞呈多角形体积明显增大时常有较长的黑色触角。






    注意事项


    1

    RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好;

    2

    分化的细胞贴壁牢固,传代的时候请勿强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞

    3

    吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;


    4

    细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关,有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况,连分化细胞都贴壁较松,此时更适宜用巴氏管吹打

    5

    培养时,无法保证100% 不分化,通过传代可以将分化比例控制在一定范围;

    6

    RAW 264.7分裂活跃,记得每天看一看,周末也要抽点时间关心一下它哦~


    养细胞不易,每个细胞对我们而言,都像是宝宝,含在嘴里怕化了,捧在手里怕摔了。


    正是因为对科研的无畏坚持,让我们更有力量接受考验,因为科研本身,值得敬畏和付出。



    图片



    RAW 264.7的起源


    加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。


    他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。


    RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒),对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。


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