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    大鼠大脑皮层神经元细胞培养实验——机械性划割培养

    发布时间: 2021-12-05  点击次数: 163次

    材料与仪器

    SD大鼠
    硼酸硼砂缓冲液 胰酶-EDTA 消化液 D-Hanks’
    眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱

    步骤


    一、实验步骤
     
    1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴(匕匕)妥钠麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤,依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜,无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中。
     
    2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层,除去脑膜,剪碎组织成约1mm3 大小,加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱内消化20 min,中间摇晃一次。
     
    3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM+10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。
     
    4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的 DMEM+10%FBS 的离心管内,用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次,静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤 2~3 次。
     
    5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。
     
    6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min,弃上清,管内加入新鲜培养液(DMEM+20%FBS)并吹打 成单细胞悬液。
     
    7. 细胞计数,调整细胞密度按1.5x105/cm2  种入6 孔板内,放入CO2 孵箱中培养。培养48 h 后换液并 加入Ara-C使其终浓度为 1x10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量换液。以后每隔 3 天半量换液一次。


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