销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 哺乳动物中制备基因组 DNA 实验

    哺乳动物中制备基因组 DNA 实验

    发布时间: 2021-12-14  点击次数: 102次

    材料与仪器

    动物组织
    PBS 乙酸铵 乙醇 酚 氯仿 异戊醇 TE
    离心机 摇床 研钵

    步骤


    1.  切下组织并立即剪成小块,置于液氮中冻结。
     
    2.  将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。
     
    3.  500 g 离心细胞5 min,弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。

    4.  细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬,500 g 离心5 min,弃上清,重复1次。

    5.  用1体积 的消化缓冲液重悬细胞。
     
    6.  将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。
     
    7.  用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品,1 700 g 离心10 min。

    8.  如果样品溶解得不好, 再加1体积不含蛋白酹K的消化缓沖液,并重复离心。

    9  如果在界面上有一层厚的白色物质,重复有机抽提,将上层(水溶液)转移至一个新管中。
     
    10.  加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉,1 700 g 离心2 min。
     
    11.  用70%乙酵洗涤,晾干,沉淀用TE。

    12.  缓冲液重新溶解,使终浓度在约1 mg/ml 左右。


    注意事项

    1.  如果是用肝组织,要除去胆囊,因其含有高水平的各种消化酶。

    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎关注安培生物科技有限公司了解更多技术与产品资讯。


    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、独特的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]