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    细胞培养的注意事项

    发布时间: 2022-02-28  点击次数: 180次
    01

    冷冻管应如何解冻? 


    取出冷冻管后,须立即放入37 C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。





    02

    细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

    除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分贴壁细胞株,在解冻之后,应直接放入含有12-16ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,悬浮细胞可先离心去掉DMSO,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。





    03

    可否使用不一样的培养基培养同一个细胞呢?

    不能。每一个细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活或者老化空泡现象,如一定要替换,建议驯化,按照血清的驯化方式操作即可。







    04

    可否使用不同品牌的血清进行细胞培养呢?

    需要按比例驯化,新旧血清比为:3:2,1:2,1:3直到完全更替。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。









    05

    培养细胞时应使用5 %或10% CO2?或根本没有影响?

    一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。





    06

    何时需更换培养基?

    视细胞生长密度而定,整体50%以下2-3天更换一次培养基,整体密度50%以上一天更换一次或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。



                                                             


    07

    附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度?应如何处理?

    一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于–20 C,避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低,并可减少污染之机会。





    08

    悬浮性细胞应如何传代处理?

    一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部分含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。





    09

    贴壁细胞如何传代处理? 

    依照细胞株基本数据和细胞的生长情况传代,若第一次接种不了解细胞的基本特征,建议1:2传代,后续观察细胞特点,若1-2天即可达到密度80%以上建议1:3或以上。传代的时候请注意:细胞数太少或稀释得太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。





    10

    欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

    欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡。



    细胞培养注意以上操作,有事半功倍的效果哦



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    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、独特的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。


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