销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 测定蛋白含量都有哪些方法?

    测定蛋白含量都有哪些方法?

    发布时间: 2022-11-01  点击次数: 351次

    蛋白的含量的测定方法主要有紫外分光光度法、Lowry法、BCA法等。



    紫外分光光度法


    原理

    蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环在275~280mm有一紫外吸收峰。在一定浓度范围内,其在280mm的吸光度与蛋白浓度成正比。


    方法

    取适量蛋白溶液(约3.5ml),置于光径为1cm的石英比色杯、用与溶解蛋白的缓冲液相同的缓冲液为对照,在280mm波长处测定吸光度,吸光度为1.0的蛋白溶液,蛋白浓度约为1.0mg/ml。当溶液中含少量核酸时,应同时测定260nm波长处的吸光度,以下式估算蛋白浓度:蛋白浓度(mg/ml)=1.55A280-0.75A260。该测定方法误差较大,有紫外光吸收的物质(如核酸)干扰大。


    材料和仪器

    (1)4%Na₂CO3;(2)0.2mol/LNaOH;(3)1%CuSO4;(4)2%酒石酸钠。试剂A:使用前,将(1)(2)(3)(4)试剂以50:50:1:1的比例混合均匀,当天使用。试剂B:酚试剂。



    Lorry法

    Lowry法灵敏度较高,线性范围为20~100ug/ml。该方法干扰因素主要有:高浓度的胍盐、尿素等变性剂,Triton、Tween等去垢剂,EIDTA等整合剂,以及Tris、甘氨酸等等。


    材料和仪器

    材料:(1)4%Na₂CO3;(2)0.2mol/LNaOH;(3)1%CuSO4;(4)2%酒石酸钠。试剂A:使用前,将(1)(2)(3)(4)试剂以50:50:1:1的比例混合均匀,当天使用。试剂B:酚试剂。

    仪器:分光光度计。


    操作步骤

    (1)准确称取10mg标准蛋白(常用牛血清白蛋白或人血清白蛋白)加蒸馏水溶解定容至100ml。

    (2)取6支试管分别编为0~5号,分别加入步骤(1)制备的标准蛋白溶液0、0.08、0.16、0.24、0.32、0.40ml,并都用蒸馏水补足至0.4ml。

    (3)各试管加入试剂A 2ml,混匀,室温放置10分钟。

    (4)各试管加入试剂B 0.2ml,立即混匀,室温或37℃水浴中,保温30分钟。

    (5)在分光光度计上,以0号为参比,测定各管样品在750mm的吸光度值。

    (6)以蛋白浓度为横座标,吸光度为纵座标绘制标准曲线,或作直线回归。

    (7)取样品溶液0.4ml,按步骤(1)~(5)测定,将测得的吸光度值代入上述标准曲线,计算蛋白浓度。


    注意:如果样品浓度过高,可用蒸馏水作适当稀释。



    BCA法


    BCA法的优点是抗干扰能力强,其原理是:在碱性溶液中,蛋白将二价铜还原成一价铜,后者与试剂中的BCA(二辛可酸,Bicinchoninic acid)形成一个在562mm处具有最大吸光度的紫色复合物,其吸光度与蛋白浓度成正比,线性范围20~100ug/ml。


    材料和仪器

    试剂A:1%BCA二钠盐,2%碳酸钠,0.16%酒石酸钠,0.4%氢氧化钠和0.95%碳酸氢钠。用50%NaOH或碳酸氢钠调pH11.25。


    试剂B:4%硫酸铜

    工作液:100倍体积试剂A与2倍体积试剂B混合。


    操作步骤

    (1)准确称取10mg标准蛋白(常用牛血清白蛋白或人血清白蛋白)加蒸馏水溶解定容至100ml。

    (2)取6支试管分别编为0~5号,分别加入步骤1制备的标准蛋白溶液0、20、40、60、80、100 ul,并都用蒸馏水补足至100ul。

    (3)各试管加入工作液2ml,混匀,37℃水浴保温30分钟。

    (4)在分光光度计上,以0号为参比,测定各管样品在562mm的吸光度值。

    (5)以蛋白浓度为横座标,吸光度为纵座标绘制标准曲线,或作直线回归:

    (6)取样品溶液100 ul,按步骤1~4测定,将测得的吸光度值代入上述标准曲线,计算蛋白浓度。


    注意:如果样品浓度过高,可用蒸馏水作适当稀释。


    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯

     

    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业



在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]