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    端粒显示实验

    发布时间: 2022-12-01  点击次数: 123次

    简介

    端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的 DNA 重复序列,它与多种端粒结合蛋白结合在一起,发挥重要的生物学功能,在细胞分裂的过程中,尽管端粒也会不断的缩短,但可以通过端粒酶的催化,以自身 RNA 为模板进行补充,从而代偿了这一损失。


    端粒的功能保护染色体末端完整性,稳定染色体,保障染色体 DNA 在复制的过程中不被缩短,保护染色体结构基因,防止基因组 DNA 降解、防止染色体末端融合,调节细胞生长、衰老等作用。


    目前,用于端粒显示实验的方法主要有 3 种:Southern印迹法、Q-FISH法和qPCR法。


    原理

    Southern印迹法检测端粒长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异,在同一种生物体内为特定序列,如人端粒是由 6 个碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋白组成。通过与放射性同位素 32P 标记的探针 32P-(TTAGGG)n,检测末端限制性片段(terminal restriction fragments,TRF)的长度分布情况,并计算出端粒长度的平均值。
     
    Q-FISH法检测端粒形态及长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异,但在同一种生物体内为特定序列,如人端粒是由 6 个碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋白组成。因此,对于端粒长度的检测,传统上可以对上述重复序列设计探针,采用核酸分子杂交技术进行测量。
     

    QPCR法检测端粒长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异,但在同一种生物体内为特定序列,如人端粒是由 6 个碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋白组成。因此,对于端粒长度的检测,传统上可以对上述重复序列设计探针,采用核酸分子杂交技术进行测量。基于一个细胞中端粒长度的均值与端粒-单拷贝基因比率(Telomere-to-Single Copy Gene ratio,T/S 比率)有关的证据,通过测量和计算出 T/S 比率,从而测量出端粒的长度。



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