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    消除微生物污染

    发布时间: 2023-01-06  点击次数: 138次

    原理

    通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞,以高浓度抗生素清洗培养物数次,然后将培养物传代,用加抗生素的培养基传三次,再用不加抗生素的培养基传三次,每次传代后都要检测是否污染。

    材料与仪器

    DBSS
    高浓度抗生素培养液
    用于传代培养的材料 带有40×或60×物镜的相差显微镜 用于支原体染色的材料

    步骤

    1. 仔细收集污染培养液,如有可能,应测试该有机体对一系列抗生素的敏感性,如果做不到,则应对培养液进行高压灭菌或加入次氯酸盐。

    2. 用 DBSS 冲洗细胞(每一次冲洗可使污染物浓度减少两个对数级,除非污染物黏贴在细胞上)。

    (a)对于单层培养物,用 DBSS 冲洗培养物三次,然后用胰蛋白酶处理,再用 DBSS 通过离心与再悬浮清洗细胞两次以上。

    (b)对于悬浮培养物,通过离心和重悬,用 DBSS 冲洗培养物 5 次。

    3. 将细胞以尽可能低而又合适的细胞浓度接种于新的培养瓶内。

    4. 加入含高浓度抗生素的培养基,每两天换一次。

    5. 用高浓度抗生素培养基进行传代培养。

    6. 重复进行 1~4 的步骤,传代培养三次。

    7. 移去抗生素,在无抗生素情况下,将这些细胞再进行三次传代培养。

    8. 用相差显微镜及 Hoechst 染色检査培养物。

    9. 对这些细胞再进行两个月的培养,不加抗生素,检査以确定所有污染已被消除。

    常见问题

    一般的原则是应将污染的培养物丢弃,而不要试图去除污染,除非是至关重要必须保留的细胞系才考虑去除污染。在任何情况下,很难做到完-全消除污染。特别是在酵母污染时,如果试图去除污染,可能导致产生更顽固的对抗抗生素的细胞。


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