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    细胞复苏

    发布时间: 2023-01-11  点击次数: 68次

    简介

    细胞复苏是将冻存在液氮中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。

    材料与仪器

    器材:37℃ 水浴箱、离心机、无菌试管以及培养瓶。
     
    试剂:
     
    ① 含 20% 血清 RPMI 1640 培养液;

     

    步骤

    细胞复苏的基本过程可分为如下几步:
     
    A 从液氮中取出细胞安瓿或冻存管,置 37℃ 水浴中迅速融化,一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。
     
    B 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以减少污染机会。
     
    C 吸取冻存管内容物缓慢加入含 4-5 ml 培养液的 T-25 细胞培养瓶中,置 5%CO2、37℃ 细胞培养箱培养,次日换液。也可通过离心去除细胞保护剂,再进行细胞培养。

     

    注意事项

    冻存细胞并非能达到 100% 复苏成功。复苏失败可能与以下因素有关,冻存时细胞数量少或生长状态不良;细胞受细菌或支原体污染;液氮罐保管不善;复苏时培养条件改变,如将胎牛血清换成小牛血清;复苏方法不得当等。


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