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    细胞吞噬活动观察实验

    发布时间: 2023-01-13  点击次数: 60次

    简介

    高等动物体内存在着具有防御功能的吞噬细胞系,它是由单核细胞和粒细胞等白细胞构成,是机体内免疫系统的重要组成部分。在白细胞中,以粒细胞和单核细胞的吞噬活动较强,故被称为吞噬细胞。

    原理

    细胞吞噬活动观察实验的基本原理是单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。巨噬细胞主要靠吞噬作用处理异物;当机体受到细菌等病原体或其他异物入侵时,巨噬细胞首先在趋化因子的作用下向异物移动,然后伸出伪足包裹异物,将异物吞入胞浆内形成吞噬泡,随后溶酶体与吞噬泡融合并消化异物。

    材料与仪器

    器材:
    载玻片、盖玻片、解剖剪、镊子、2 ml 注射器、针头、光学显微镜、小白鼠、蟾蜍。
    试剂:

    ① 6% 淀粉肉汤(含 0.3% 台盼蓝);

    ② 1% 鸡红细胞悬液

    (取鸡血 1 ml(肝素抗凝)加入到 99 ml 鸡生理盐水中);

    ③小鼠生理盐水
    ④鸡生理盐水
    ⑤蟾蜍生理盐水
    ⑥墨汁

    步骤

    细胞吞噬活动观察实验的基本过程可分为如下几步:

    (一)观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活动

    A 实验前 2 天,每天向小鼠腹腔注射 6% 淀粉肉汤 1 ml(起标记作用),以诱导腹腔产生较多的巨噬细胞(此操作由教师在实验前完成)。
    B 实验时,每组取 1 只经上述处理过的小鼠,腹腔注射 1% 鸡红细胞悬液 0.5~1 ml(注射时从小鼠下腹外侧进针,呈 45° 角刺入腹腔),然后轻揉小鼠腹部以使细胞悬液分散均匀。
    C 30 min 后,再向腹腔内注射 0.5 ml 小鼠生理盐水,轻揉小鼠腹部,使其腹腔液稀释。
    D 3 min 后,颈椎脱位法处死小鼠。
    E 用注射器抽取腹腔液(剪开腹腔,把内脏推向一侧,用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液),滴片,然后盖上盖片。
    F 镜下观察。

    (二)观察蟾蜍白细胞的吞噬活动

    A 用注射器吸取蟾蜍生理盐水稀释墨汁 0.5~1 ml,注射入蟾蜍尾杆骨两侧的背淋巴囊内,将蟾蜍放在室温环境中。
    B 约 2~3 h 后,用注射器抽取背淋巴囊内的淋巴液,滴在载玻片上,加盖玻片进行观察。

    注意事项

    1 颈椎脱位法处死小鼠:将小鼠放在实验台上,右手抓住鼠尾向后拉,左手的拇指和食指向下按住头部;此时双手的拇指和食指在颅骨和脊椎间同时向外用力一扽,使颅脑与脊髓分离,从而造成脊髓与脑髓断离,小鼠会立即死亡。参见图 4-3。

    2 蟾蜍尾杆骨两侧的背淋巴囊。参见图 4-4。




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