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    Brachet反应显示细胞中DNA和RNA

    发布时间: 2023-01-13  点击次数: 57次

    简介

    Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 是利用了 DNA 和 RNA 这种结构上的差异,采用不同的染料同时显示两者在细胞中的分布情况。


    原理

    Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 的基本原理是利用了 DNA 和 RNA 这种结构上的差异,采用不同的染料同时显示两者在细胞中的分布情况。甲基绿、派洛宁(methyl green,pyronin)为带有正电荷的碱性染料(结构式见图3-2),可与带有负电荷的核酸分子结合,两种染料的作用具有选择性,甲基绿带有2 个 正电荷,易与双链的 DNA 分子结合,使其显示蓝绿色;派洛宁带有1 个 正电荷,易与单链的 RNA 分子结合,使其显示红色。也有人认为其染色原理与 DNA 和 RNA 分子的不同聚合程度有关。细胞经甲基绿-派洛宁混合液处理后,其 DNA 和 RNA 出现不同的显色反应,以此可对细胞中的DNA、RNA进行定位、定性和定量分析。

    材料与仪器

    器材:

    尖头镊子、染色缸、盖片、载玻片、吸管、吸水滤纸、普通光学显微镜、CO2 培养箱、 HeLa 人宫颈癌上皮细胞。


    试剂:
    ①0.01 mol /L PBS(pH 7.2)(36 mL 0.2 mol / L 磷酸氢二钠液14 mL 0.2 mol /L 磷酸二氢钠液加双蒸水至1000 mL 。混匀,待完-全溶解分装,经高压灭菌后保存于4 ℃ 冰箱备用。)
    ②Carnoy 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)
    ③甲基绿-派洛宁混合液
    ④蒸馏水
    ⑤丙酮
    ⑥二甲苯
    ⑦中性树胶

    步骤

    Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 的基本过程可分为如下几步:
    A.将培养的 HeLa 细胞接种于盖片,24~48 h 后生长为单层。
    B.取细胞盖片1 张 ,用 PBS(pH7.2)漂洗3 次 ,吸水滤纸吸去液体。
    C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。
    D.向盖片滴加甲基绿-派洛宁混合液,染色30 min 。
    E.蒸馏水轻轻漂洗2~3 次 (每次2~3 s ),滤纸吸去多余水分。
    F.盖片浸入丙酮中分色2~3 s 。
    G.浸入丙酮-二甲苯(1:1)中5 s 。
    H.浸入纯二甲苯中透明5 min 。
    I.滴1 滴 中性树胶于载玻片上,将盖片细胞面朝下封片。
    J.镜下观察。


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