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    还原糖和总糖的测定

    发布时间: 2023-01-30  点击次数: 1236次

    原理

    各种单糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻-底水解成有还原性的单糖。在碱性条件下,还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它产物,在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质深浅的程度呈一定的比例关系,在540nm 波长下测定棕红色物质的消光值,查对标准曲线并计算,便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。多糖水解时,在单糖残基上加了一分子水,因而在计算中须扣除已加入的水量,测定所得的总糖量乘以0.9 即为实际的总糖量。

    材料与仪器

    步骤

    一、实验材料、仪器和试剂

    1、实验材料:面粉。

    2、仪器: (1) 25ml 血糖管或刻度试管×11;(2) 大离心管或玻璃漏斗×2;(3) 烧杯:100ml×1;(4) 三角瓶:100ml×1;(5) 容量瓶:100ml×3;(6) 刻度吸管:1ml×11、2ml×4、10ml×1;(7) 恒温水浴;(8) 沸水浴;(9) 离心机(过滤法不用此设备);(10)电子天平;(11)分光光度计;

    3、试剂:

    (1) 1mg/ml葡萄糖标准液:准确称取 100 mg分析纯葡萄糖(预先在 80 ℃烘至衡重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移至100ml的容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。

    (2) 3,5-二硝基水杨酸试剂:将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2NNaOH 溶液,加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml,贮于棕色瓶中备用。

    (3) 碘-碘化钾溶液:称取5g碘和10g碘化钾,溶于100ml 蒸馏水中。

    (4) 酚酞指示剂:称取0.1g酚酞,溶于250ml 70%乙醇中。

    (5) 6NHCl

    (6) 6NNaOH

    二、操作步骤

    1、制作葡萄糖标准曲线:

    取7支具有25ml刻度的血糖管或试管,编号,按下表所示的量,精确加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。


    将各管摇匀,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温,再以蒸馏水定容至25ml刻度处,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀(如用大试管,则向每管加入21.5ml蒸馏水,混匀)。在540nm波长下,用0号管调零,分别读取1-6号管的消光值。以消光值为纵坐标,葡萄糖毫克数为横坐标,绘制标准曲线。

    2、样品中还原糖和总糖的测定:

    (1)样品中还原糖的提取:

    准确称取2g食用面粉,放在100ml的烧杯中,先以少量的蒸馏水调成糊状,然后加50ml蒸馏水,搅匀,置于50℃恒温水浴中保温20分钟,使还原糖浸出。离心或过滤,用20ml蒸馏水洗残渣,再离心或过滤,将两次离心的上清液或滤液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。

    (2)样品中非还原糖的水解和提取:

    准确称取1 g食用面粉,放在100ml 的三角瓶中,加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸馏水,置于沸水浴中加热水解30分钟。取1~2 滴水解液于白瓷板上,加1滴碘-碘化钾溶液,检查水解是否完-全。如已水解完-全,则不显蓝色。待三角瓶中的水解液冷却后,加入一滴酚酞指示剂,以6NNaOH中和至微红,过滤,再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸,将滤液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀。精确吸取10ml定容过的水解液,移至另一100ml的容量瓶中,定容,混匀,作为总糖待测液。

    (3)显色和比色:

    取5支25ml刻度的血糖或刻度试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂。

    注意事项

    常见问题

    1、用血糖管比大试管方便。

    2、离心比过滤易得清液。

    3、标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比色


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