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    WB蛋白样本煮多久合适?

    发布时间: 2024-04-28  点击次数: 244次

    WB蛋白样本煮制时间的那些事儿

    大家在进行 WB 实验时,可能会有这样的疑问:蛋白样本到底煮多久合适呢?🤔
    通常来说,WB 蛋白样本的煮制时间在 3-5 分钟左右。不过,这只是一个大致的范围哦,具体时间还得根据实际情况来调整。
    通常6孔板细胞80%以上密度,需200ul,其他按平板面积比类推。

    在煮制蛋白样本时,有几点需要注意哦:

    1.煮制时间不宜过长,不然可能会导致蛋白变性,影响后续实验结果;

    2.煮制温度控制在95-100°C之间为宜;

    3.煮制过程中要记得混匀样本,确保样本受热均匀。

    样品核酸、蛋白浓度过高时,煮样后会发现枪头吸不上来,非常粘、一砣一砣的,很容易堵住枪头
    这时候建议两种处理方法:
    1.再煮5min。常规煮样时间3-5min,样品过浓时就煮10min;
    2.如果10min煮样后,仍然吸不起来,才适当增加buffer,继续煮;也可以对样品进行超声。煮样时间若过长,蛋白会凝固,此时已失去继续WB的意义,请丢弃(判断标准:出现明显的蛋白沉淀和水分层)。

    如果你对煮制时间拿不准,不妨先进行预实验,找到最恰当的煮制时间吧!


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